简介
焦磷酸盐广泛存在于细胞内外，细胞内的焦磷酸盐主要来自线粒体，不能以自由扩散的方式通过细胞膜，需要经过细胞膜上的渐进性强直蛋白通道转移至细胞外。细胞外的焦磷酸盐一部分来自细胞内焦磷酸盐的跨膜转运，另一部分由位于细胞膜上的一系列胞外酶生成。
焦磷酸盐作为碱性磷酸酶的一种自然底物，可通过许多化学反应产生，譬如柠檬酸盐和ATP的水解、DNA复制和RNA聚合、环磷酸腺苷（c-AMP）形成以及脂肪酸-辅酶A酯的形成。基于荧光法的焦磷酸盐检测操作更加简单可靠，灵敏度更高。
材料
•焦磷酸测定试剂盒（默克：MAK168）
•96孔黑色不透明板（赛默飞：237105）
•Feyond-A300多功能酶标仪
方法
•标品配制
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原液浓度
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原液体积μL
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稀释液体积μL
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标品终浓度
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50mM
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10
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490
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1mM
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1mM
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50
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450
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100uM
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100uM
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45
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105
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30uM
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100uM
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15
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135
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10uM
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100uM
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4.5
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145.5
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3uM
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10uM
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15
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135
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1uM
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3uM
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15
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135
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0.3uM
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1uM
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15
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135
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0.1uM
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•操作步骤
根据相应的产品说明书，制备Master Reaction Mix工作液。在96孔黑色平底微孔板的每孔中加入50ul工作液，再在每孔中添加50ul的焦磷酸盐标品，每个标品设置3个复孔。混匀后避光孵育15分钟，开始仪器检测。
•仪器参数设置
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试剂波长
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EX/EM：316/456
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PMT增益
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中高
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稳定时间
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150ms
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积分时间
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40us
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图1. 标品布局及参数设置
4.结果
Feyond-A300内置的数据处理软件可直接将焦磷酸盐标准品的浓度与荧光强度进行标准曲线拟合，利用四参数（4PL）拟合方式，给出曲线方程与曲线拟合度R²，提供的标准曲线对样品进行高精度测定，无需电脑操作，报告包含标准曲线与样品浓度等信息。
图2. 焦磷酸盐标准曲线
总结
焦磷酸盐作为一种自然底物，在多种生理过程中起到了重要的作用，也与多种疾病息息相关，奥盛Feyond-A300多功能酶标仪搭配高精度试剂盒可实现对焦磷酸盐的精确定量。
参考文献
[1]刘梦苑, 吴立玲, 王瑾瑜. 焦磷酸盐与血管钙化[J]. 生理科学进展
