1.罗兹-哥特里法(碱性乙醚提取法)(依据GB 5413.3-2010)
此法为国际标准化组织(ISO)、联合国粮农组织/世界卫生组织(FAO/WHO)等采用,为乳及乳制品等脂类定量的国际标准法。
(1)原理利用氨-乙醇溶液破坏乳的胶体性状及脂肪球膜,使非脂成分溶解于氨-乙醇溶液中而脂肪游离出来,用乙醚和石油醚抽提样品的碱水解液,通过蒸馏或蒸发去除溶剂,测定溶于溶剂中的抽提物的质量。
(2)试剂除非另有规定,本法所用试剂均为分析纯或以上规格,水为GB/T6682-2008规定的三级水。
①淀粉酶:酶活力≥1.5U/mg。
②氨水:质量分数约25%(可使用比此浓度更高的氨水)。
③乙醇:体积分数至少为95%。
④乙醚:不含过氧化物,不含抗氧化剂,并满足试验的要求。
⑤石油醚:沸程30~60℃。
⑥混合溶剂:等体积混合乙醚和石油醚,使用前制备。
⑦碘溶液:约0.1mol/L。
⑧刚果红溶液(C32H22Na6Na2O6S2):将1g刚果红溶于水中,稀释至100mL。
⑨盐酸(6mol/L):量取50mL 12mol/L盐酸缓慢倒入40mL水中,定容至100mL,混匀。
(3)仪器
①分析天平:感量为0.1mg。
②离心机:可用于放置抽脂瓶或管,转速为500~600r/min。
③电热恒温水浴。
④烘箱。
⑤抽脂瓶:抽脂瓶应带有软木塞或其他不影响溶剂使用的瓶塞(如硅胶或聚四氟乙烯)。软木塞应先浸于乙醚中,后放入60℃或60℃以上的水中保持至少15min,冷却后使用。不用时需浸泡在水中,浸泡用水每天更换一次。
(4)操作步骤
①脂肪收集瓶的准备:于干燥的脂肪收集瓶中加入几粒沸石,放入烘箱中干燥1h。然后使脂肪收集瓶冷却至室温,称量,精确至0.1mg。
②空白试验:用10mL水代替试样作空白试验。
③测定:
a.精确吸(称)取一定量样品(牛乳10.00mL;乳粉1~5g,用10mL 60℃水溶解)于抽脂瓶中。
b.加入2.0mL氨水,充分混合后立即将抽脂瓶放入(65±5)℃的水浴中,加热15~20min(不时取出振荡)。取出冷却至室温。静置30s后可进行下一步骤。
c.加入10mL乙醇,缓和但彻底地进行混合,避免液体太接近瓶颈。如果需要,可加入两滴刚果红溶液。
d.加入25mL乙醚,塞上瓶塞,将抽脂瓶保持在水平位置,小球的延伸部分朝上夹到摇混器上,按约100次/min振荡1min,也可采用手动振摇方式,但均应注意避免形成持久乳化液。抽脂瓶冷却后小心地打开塞子,用少量的混合溶剂冲洗塞子和瓶颈,使冲洗液流入抽脂瓶。
e.加入25mL石油醚,塞上重新润湿的塞子,按d中所述,轻轻振荡30s。
f.将加塞的抽脂瓶放入离心机中,在500~600r/min下离心5min。或将抽脂瓶静置至少30min,直到上层液澄清,并明显与水相分离。
文章来源:《食品理化检测技术》