介绍二硫腙比色法(依据《GB5009.12-2010食品安全国家标准食品中铅的测定》中第四法)。
1.原理
试样经消化后，在pH8.5～9.0时，铅离子与二硫腙生成红色络合物，溶于三氯甲烷。络合物颜色的深浅与样品中铅的含量呈正比，于波长510nm处测吸光度，与标准系列比较定量。
2.试剂
(1)氨水(1+l)。
(2)盐酸(1+1)：量取100mL盐酸，加入100mL水中。
(3)酚红指示液(1g/L)：称取0.10g酚红，用少量多次乙醇溶解后移入100mL容量瓶中并定容至刻度。
(4)盐酸羟胺溶液(200g/L)：称取20.0g盐酸羟胺，加水溶解至50mL，加2滴酚红指示液，加氨水(1+1)，调pH至8.5～9.0(由黄变红，再多加2滴)，用二硫踪-三氯甲烷溶液(10)提取至三氯甲烷层绿色不变为止，再用三氯甲烷洗两次，弃去三氯甲烷层，水层加盐酸(1+1)至呈酸性，加水至100mL。
(5)柠檬酸铵溶液(200g/L)：称取50g柠檬酸铵，溶于100mL水中，加2滴酚红指示液(3)，加氨水(1)，调pH至8.5～9.0，用二硫腙-三氯甲烷溶液(10)提取数次，每次10～20mL，至三氯甲烷层绿色不变为止，弃去三氯甲烷层，再用三氯甲烷洗两次，每次5mL，弃去三氯甲烷层，加水稀释至250mL。
(6)氰化钾溶液(100g/L)：称取10.0g氰化钾，用水溶解后稀释至100mL。
(7)三氯甲烷。
(8)淀粉指示液：称取0.5g可溶性淀粉，加5mL水搅匀后，慢慢倒入100ml沸水中，边倒边搅拌，煮沸，放冷备用，临用时配制。
(9)硝酸(1+99)：量取1mL硝酸，加入99mL水中。
(10)二硫腙-三氯甲烷溶液(0.5g/L)：保存冰箱中，必要时用下述方法纯化。称取0.5g研细的二硫腙，溶于50mL三氯甲烷中，如不全溶，可用滤纸过滤于250mL分液漏斗中，用氨水(1+99)提取三次，每次100mL，将提取液用棉花过滤至500mL分液漏斗中，用盐酸(1+1)调至酸性，将沉淀出的二硫腙用三氯甲烷提取2～3次，每次20mL，合并三氯甲烷层，用等量水洗涤两次，弃去洗涤液，在50℃水浴上蒸去三氯甲烷。精制的二硫腙置硫酸干燥器中，干燥备用。或将沉淀出的二硫腙用200，200，100mL三氯甲烷提取三次，合并三氯甲烷层为二硫腙溶液。
(11)二硫腙使用液：吸取1.0mL二硫腙溶液，加三氯甲烷至10mL，混匀。用1cm比色杯，以三氯甲烷调节零点，于波长510nm处测吸光度(A)，用下式算出配制100mL二硫腙使用液(70%透光率)所需二硫腙溶液的体积(mL)。
(12)硝酸-硫酸混合液(4+1)。
(13)铅标准溶液(1.0mg/mL)：准确称取0.1598g硝酸铅，加10mL硝酸(1+99)，全部溶解后，移入100ml容量瓶中，加水稀释至刻度。
(14)铅标准使用液(10.0ug/mL)：吸取1.0mL铅标准溶液，置于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度。
3.仪器
(1)分光光度计。
(2)天平：感量为1mg。
4.操作步骤
(1)试样预处理(灰化法)：称取1.00～5.00g(据铅含量而定)试样，置于石英或瓷坩锅中，先小火加热至炭化，然后移入马弗炉中，500℃灰化3h，放冷。若灰化不彻底，则加1ml混合酸，置可调式电炉上小火加热，再在马弗炉中500℃灰化1h，反复上述操作，直至消化完全。放冷。加1mL硝酸(1+1)，加热，使灰分溶解，移入50mL容量瓶中，用水洗涤坩锅，洗液并入容量瓶中，加水至刻度，混匀备用。同时做试剂空白试验。
(2)测定
①吸取10.0mL消化后的定容溶液和同量的试剂空白液，分别置于125mL分液漏斗中，各加水至20mL。
②吸取0.00，0.10，0.20，0.30，0.40，0.50mL铅标准使用液(相当0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ug铅)，分别置于125mL分液漏斗中，各加硝酸(1+99)至20mL。
③于试样消化液、试剂空白液和铅标准液中各加2.0mL柠檬酸铵溶液(200g/L)，1.0mL盐酸羟胺溶液(200g/L)和2滴酚红指示液，用氨水(1+1)调至红色，再各加2.0mL氰化钾溶液(100g/L)，混匀。
④各加5.0ml.二硫腙使用液，剧烈振摇1min，静置分层。
⑤三氯甲烷层经脱脂棉滤入1cm比色杯中，以三氯甲烷调节零点于波长510nm处测吸光度，各点减去零管吸收值后，绘制标准曲线或计算一元回归方程，样品的吸光度与曲线比较。
5.结果计算
式中X——试样中铅的含量，mg/kg或mg/L
m1——测定用试样液中铅的质量，ug
m2——试剂空白液中铅的质量，ug
m——试样质量或体积，g或mL
V1——试样处理液的总体积，mL
V2——测定用试样处理液的总体积，mL
以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留两位有效数字。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
6.要点提示
(1)本法检出限为5mg/kg。
(2)双硫腙固体(或其溶液)应低温(4～5℃)避光保存，以免被氧化。
(3)pH对测定结果有明显的影响，若pH大于12时，Pb2+可生成PbO22-，不被二硫腙络合，故要严格控制pH在8.5～9.0范围内。
(4)测定中加柠檬酸铵、氰化钾和盐酸羟胺的目的是防止铜、铁、锌等离子的干扰。
(5)氰化钾剧毒，不能用手接触，必须在溶液调至碱性后再加入。废的氰化钾溶液应加NaOH和FeSO4，使其变成亚铁氰化钾再倒掉。
(6)三氯甲烷不应含氧化物。
检查方法：量取10mL三氯甲烷，加25mL新煮沸过的水，振摇3min，静置分层后，取10mL水溶液，加数滴碘化钾溶液(150g/L)及淀粉指示液，振摇后应不显蓝色。
处理方法：于三氯甲烷中加入1/10～1/20体积的硫代硫酸钠溶液(200g/L)洗涤，再用水洗后加入少量无水氯化钙脱水后进行蒸馏，弃去最初及最后的1/10馏出液，收集中间馏出液备用。
(7)测铅所用玻璃仪器均采用10%～20% HNO3浸泡过夜，用自来水反复冲洗，最后用去离子水冲洗干净。
相关链接：方便面中铅的测定（二）
文章来源：《食品理化检测技术》