Cu是人体的必需微量元素，在人体的新陈代谢过程中起着重要的作用。Cu是组成体内多种金属酶的重要成分，主要功能是促进铁构成血红蛋白，也是许多氧化酶的辅助因素。人体缺铜时，可发生贫血、中性粒细胞减少、生长缓慢和情绪不稳。但如果食品在生产、加工、包装、运输和储藏等过程中受污染，使其铜含量很高时，人们经常食用，就会在体内积累过量的铜，也会引起中毒。食品中铜的测定方法有原子吸收光谱法、二乙基二硫代氨基甲酸钠法等两种国家标准方法。在此介绍二乙基二硫代氨基甲酸钠法(依据GB/T5009.13-2003第二法)。
1.原理
样品经消化后，在碱性条件下，铜离子与二乙基二硫代氨基甲酸钠(铜试剂，简称DDC-Na)作用，生成黄色络合物，溶于CCl4，在440nm波长处与标准系列比色定量。
2.试剂
(1)四氯化碳。
(2)柠檬酸铵-乙二胺四乙酸二钠溶液：称取20g柠檬酸铵及5g乙二胺四乙酸二钠溶于水中，加水稀释至100mL。
(3)硫酸(1+17)：量取20mL硫酸，倒入300mL水中，冷后再加水稀释至360mL。
(4)氨水(1+1)。
(5)酚红指示液(1g/L)：称取0.1g酚红，用乙醇溶解至100mL。
(6)铜试剂溶液：二乙基二硫代氨基甲酸钠[(C2H5)2NOS2Na·3H2O]溶液(1g/L)，必要时可过滤，贮存于冰箱中。
(7)硝酸(3+8)：量取60mL硝酸，加水稀释至160mL。
(8)铜标准溶液：准确称取1.0000g金属铜(99.99%)，分次加入硝酸(4+6)溶解，总量不超过37mL，移入1000mL容量瓶中，用水稀释至刻度。此溶液每1mL相当于1.0mg铜。
(9)铜标准使用液：吸取10.0mL钢标准溶液，置于100mL容量瓶中，用0.5%硝酸溶液稀释至刻度，摇匀，如此多次稀释至每1mL相当于1.0ug铜。
3.仪器
(1)分光光度计。
(2)其他仪器：分液漏斗(125mL)、移液管、吸量管、容量瓶、烧杯等。
4.操作步骤
(1)样品消化
①谷类(除去外壳)，茶叶、咖啡等：磨碎，过20目筛，混匀。蔬菜、水果等样品取可食部分，切碎、捣成匀浆。称取1.00～5.00g样品，置于石英或瓷坩埚中，加5mL硝酸，放置0.5h，小火蒸干，继续加热炭化，移入马弗炉中，(500±25)℃灰化lh，取出放冷，再加1mL硝酸浸湿灰分，小火蒸干。再移入马弗炉中，500℃灰化0.5h，冷却后取出，以1ml硝酸(1+4)溶解4次，移入1.0mL容量瓶中，用水稀释至刻度，备用。
取与消化样品相同量的硝酸，按同一方法做试剂空白试验。
②水产类：取可食部分捣成匀浆。称取1.00～5.00g，置于石英或瓷坩锅中，加热至炭化，然后移入马弗炉中，500℃灰化3h，放冷，取出坩锅，加硝酸(1+1)，润湿灰分，用小火蒸干，在500℃灰化1h，放冷。取出坩锅。加1mL硝酸(1+1)，加热，使灰分浴解，移入50ml.容量瓶中，用水洗涤坩锅，洗液并入容量瓶中，加水至刻度，混匀备用。
③牛奶、炼乳、奶粉：称取2.00g混匀样品，按步骤②自“置于石英或瓷坩锅中”起依法操作。
④油脂类：称取2.00g混匀样品，固体油脂先加热融成液体，置于100mL分液漏斗中，加10mL石油醚，用硝酸(10%)提取2次，每次5mL，振摇1min，合并硝酸液于50ml.容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，备用。并同时做试剂空白试验。
⑤饮料、酒、醋、酱油等液体样品：可直接取样测定，固形物较多时或仪器灵敏度不足时，可把上述样品浓缩按步骤①操作。
(2)测定吸取定容后的10.0mL溶液和同量的试剂空白液，分别置于125mL分液漏斗中，加水稀释至20mL。吸取0，0.50，1.00，1.50，2.00，2.50mL铜标准使用液(相当0，5.0，10.0，15.0，20.0，25.0u8铜)，分别置于125ml分液漏斗中，各加硫酸(1+17)至20mL。
于样品消化液、试剂空白液和铜标准液中，各加5mL柠檬酸铵，乙二胺四乙酸二钠溶液和3滴酚红指示液，混匀，用氨水(1+1)调至红色。
各加2mL铜试剂溶液和10.0mL四氯化碳，剧烈振摇2min，静置分层后，四氯化碳层经脱脂棉滤入2cm比色杯中，以四氯化碳调节零点，于波长440nm处测吸光度，标准各点吸光度减去零管吸光度后，绘制标准曲线或计算直线回归方程，样品吸光值与曲线比较，或代人方程求得含量。
5.结果计算
式中x——样品中铜的含量，mg/kg或mg/L
m1——测定用样品消化液中铜的质量，ug
m2——试剂空白液中铜的质量，ug
m——样品质量(体积)，g(mL)
V1——样品消化液的总体积，mL
V2——测定用样品消化液体积，mL
结果的表述：报告平行测定的算术平均值的两位有效数字。样品含量超过10mg/kg时报三位有效数字。
6.要点提示
(1)加2mL铜试剂溶液和10.0mL CCl4后，一定要保证剧烈振摇2min。若振摇不够(不剧烈或时间不足)，可能导致萃取不完全，也可能形成乳化现象，浑浊不分层，或者即使分层，可看到CCl4层浑浊不透明，说明CCl4层中有小水滴，此时，应拿起漏斗再剧烈振摇几下，待看到漏斗下部有亮的大液滴聚集时(即上走上，下走下)，即可静置分层。
(2)CCl4层要经脱脂棉滤入比色皿中，以除去杂质颗粒。脱脂棉撕成小块塞在漏斗管的出口，不可太紧，也不可太松，太紧，滤液过滤太慢，甚至放不出液体；太松，起不到过滤作用。
(3)显色后，测量必须在1h内进行，否则黄色络合物分解，产生误差。
(4)加入CCl4时应将CCl4试剂瓶移近漏斗，快速加入，避免CCl4滴落。
文章来源：《食品理化检测技术》