(PAI-1)试剂盒使用说明书 应用双抗体夹心法测定标本中人纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)水平。用纯化的人纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入PAI-1，再与HRP 标记的PAI-1 抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的PAI-1 呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)浓度。

　　

　　(PAI-1)试剂盒使用说明书

　　

　　操作步骤：

　　

　　1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10 孔，在一、第二孔中分别加标

　　

　　准品100μl，然后在一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从一孔、第二

　　

　　孔中各取100μl 分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，

　　

　　混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 弃掉，再各取50μl 分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl 弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为600 ng/L，400 ng/L ，200 ng/L，100ng/L，50 ng/L）。

　　

　　2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样

　　

　　品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

　　

　　3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。

　　

　　4. 配液：将30（48T 的20 倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T 的20 倍）倍稀释后备用。

　　

　　5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。

　　

　　6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

　　

　　7. 温育：操作同3。

　　

　　8. 洗涤：操作同5。

　　

　　9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

　　

　　15 分钟.

　　

　　10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

　　

　　11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后15 分钟以内进行。