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HOK 人正常口腔角质细胞

       Catalogue No.: C1366

       Product Format: a T25 flask

       Culture Properties：贴壁

       Complete Growth Medium: 89%H-DMEM+10%FBS+1%双抗

        Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

        Application: Cells and cancer research

       NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.

       Components

       Item Specifications

       a T25 flask 2X106

       Manual 1 copy

       Operation steps for cell culture

       1. 吸走用于培养基，加入 3-5mL PBS 后轻轻晃动培养瓶润洗细胞；

       2. 吸干净 PBS 后加入 1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA，轻轻摇晃培养皿使胰酶浸没细胞表面，培养瓶放 37 度培养箱消化；（细胞对于消化比较敏感，消化过度会严重影响细胞状态，导致细胞传代死亡漂浮或者传代后不长。细胞消化到细胞间隙变大但未脱落，可以轻轻吹下时即可终止，禁止消化到细胞完全漂浮。混匀细胞时尽量轻柔，不要吹出大量气泡。）

       3. 加入 6-8ml 完全培养基终止消化，轻轻吹下细胞混匀；

       4. 将混匀的细胞 1000rpm（约 150g）离心 3min，弃上清，再用新鲜培养基重悬 37 度培养箱继续培养；

       传代比例: 不同细胞生长速度不一，具体传代比例视细胞生长速度而定，大部分细胞适用1:3-1:4 传代，生长较慢的细胞可以 1:2 传代。

       Cell cryopreservation

       1.冻存液：92%完全培养基+8%DMSO（可以根据实验室条件自行选择）

       2.降温步骤：4 度 10min，-20 度 2h，-80 过夜后液氮保存。

       Tips：

       1. 细胞经过运输后，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900-1000rpm(约 150g)离心 3min，弃上清。加 5ml PBS 重悬细胞，再 900-1000rpm(约 150g)离心 3min，用新鲜的完全培养基重悬接种到新的培养瓶。第二次 PBS 重悬是为了去除碎片，如果平时碎片比较少，传代时可以省略 PBS 重悬的步骤；如果碎片很多，建议 PBS 多洗几次。

       2. 细胞生长不均时，可以将细胞消化吹散后加入新的培养基重新接种或传代。

       3. 细胞生长缓慢时，可以选择提高血清浓度培养（Z高不超过 20%），也可以根据细胞生长状态，选择传代细胞到新的培养瓶中继续培养。

       4. 不同细胞贴壁性差异比较大，所以消化时间差别较大，20s-10min 均有可能，具体以细胞消化到相互分离但未脱落，并可以轻轻吹下为准，严禁消化到细胞完全漂浮。客户消化过度导致细胞死亡、漂浮、生长缓慢，不提供免费售后服务。

       5. 干冰发货均为两支，客户先复苏一支，若复苏失败及时联系我方并在我方指导下复苏第二支。若客户同时复苏两支均状态不佳，我方不提供免费售后服务。

       6. 细胞状态正常时，应尽快冻存细胞保种，冻存后应随机抽取一支检测冻存效果。我方不对客户冻存细胞导致死亡负责，客户冻存细胞死亡不提供免费售后服务。