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KFS144 细胞骨架蓝色荧光探针说明书
Cat number：
KFS144Store at -20℃ for 6 months，避光
For Research Use o
一、产品描述
本染料是 F-肌动蛋白的高亲和力探针，由蘑菇毒素制成，与蓝色荧光染料偶联。 以纳米摩尔浓度使用时，鬼笔毒素是方便的探针，可用于对甲醛固定和打孔的组织切片、细胞培养物或无细胞实验体系中的 F-肌动蛋白进行标记、鉴别和定量。
Ex/Em：350nm/450nm，比抗体染色更优越。适合于固定和通透的样本。
荧光标记的鬼笔环肽与肌动蛋白对于不同的物种，包括植物和动物具有几乎相同的高结合属性。鬼笔环肽结合具有高选择性，而 F-肌动蛋白红色荧光。呈现出很少的非特异性染色。本产品可以用于荧光显微镜、微孔板、比色皿。
二、产品包装
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组份 |
KFS144 |
储存条件 |
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细胞骨架蓝色荧光探针 |
200U/mL，200μL |
-20℃，避光 |
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三、操作说明
染色操作
本实验操作不特定针对某一特别的实验体系，但是具有很大的普遍适用性。以下操作以贴壁细胞爬片为例。注：针对贴壁细胞或96微孔板样本，每个样建议100μL染色工作液体积，本试剂盒约可操作80tests。
甲醛固定细胞
1.1 以预温的PBS，pH7.4，洗涤细胞两次。
1.2 3.7%甲醛固定细胞，室温10分钟。注意：甲醇可能导致肌动蛋白扭曲变形，因此避免选用任何含有甲醇类的固定剂。
1.3 PBS洗涤两遍。
1.4 丙酮-20度洗涤盖玻片或者含0.1%TritonX-100的PBS洗涤3~5分钟。
1.5 PBS洗涤两遍。
1.6 5μL甲醇原储液加入200μL的PBS中预染色每张盖玻片，加入1%BSA到染色液中，以减少非特异性背景。同样，在染色之前，也可以选择用1%BSA的PBS预孵育固定的细胞。
1.7 选择合适的染色液体积，建议100μL，室温浸泡盖玻片20分钟，可以加上封盖，防止水分蒸发。
1.8 PBS洗涤两遍。
1.9 长期保存，细胞应在空气中晾干，加盖在一个封固封片剂。避光2-6℃，以这种方式制备的试样保持至少6个月的肌动蛋白染色。
同时进行固定、促渗和罗丹明鬼笔环肽染色
罗丹明鬼笔环肽在4%的多聚甲醛固定缓冲液中稳定时间较短，需要快速的固定、透化和标记。
2.1 制备1mL含有50~100μg/mL的1-十六酰-sn-丙三醇-磷酸胆碱和3.7%的甲醛溶液，然后添加5~10units的染料。
2.2 染色液没过细胞，4度孵育20分钟。
2.3 缓冲液快速洗涤三次。
2.4 封片观察。