高尔基体绿色荧光探针 GolgiGreen

Cat number：KFS127

Store at -20℃，避光，12 months

For Research Use only
 

一、 产品描述 

 高尔基体绿色荧光探针 GolgiGreen（NBD C6-神经酰胺）可以用来研究神经鞘脂类的运输和代谢机制，也可以用来作为活细胞或固定细胞内高尔基体的选择性染料。
       NBD 染料对于环境敏感，在水中荧光信号微弱，但是在非质子溶剂和非极性环境中荧光增强，Ex/Em=466/536nm。
 

二、 产品组分

备注：C6-NBD-CERAMIDE，分子式：C30H49N5O6 分子量：575.74。

三、 操作说明

   NBD C6-神经酰胺-BSA 复合物制备

   活细胞和固定细胞染色，建议使用以 BSA 复合物形式存在的 NBD C6-神经酰胺。制备方法如下：

     1.1 (本试剂盒已提供)NBD C6-神经酰胺溶液，溶剂为氯fang：乙醇（体积比=19:1）。

     1.2 吸取 50μL 的 NBD C6-神经酰胺储液至小玻璃试管中，保持干燥，通入氮气流后，保持在真空放置至少1小时。再以 200μL 的无水乙醇重溶。

     1.3 称取 10mL 无血清的平衡盐溶液如，Hank’s 液+10mM HEPES，pH7.4（HBSS/HEPES）到 50mL 塑料离心管中，加入 3.4mg（使之浓度为 0.34mg/mL）的脱脂 BSA。

     1.4 涡旋混匀含有 10mL 的 BSA 溶液的试管，注入 200μL 的 NBD C6-神经酰胺乙醇溶液。涡旋震荡。
      所得到的的溶液（5 µM NBD C6-ceramide + 5 µM BSA）可以于-20 度保存。

   活细胞高尔基复合体染色

     2.1 用合适的缓冲液如 HBSS/HEPES 冲洗盖玻片上的细胞。

     2.2 5 µM NBD C6-ceramide + 5 µM BSA 孵育细胞，4 度，30 分钟。

    2.3 预冷的新鲜培养基多次冲洗样品细胞，在放于 37 度另外孵育 30 分钟。

    2.4 新鲜培养基洗涤样品，用荧光显微镜观察。

   固定细胞的高尔基复合体染色

   染色条件同上一致，但洗涤剂和含甲醇/丙酮类的固定剂必须加以避免。

     3.1 HBSS/HEPES 冲洗盖玻片上生长的细胞，用 0.5%戊二醛/10%的蔗糖/100mM 的 PIPES，pH7.0 或者2~4%多聚甲醛/PBS 室温固定 5~10 分钟。

     3.2 以预冷HBSS/HEPES 多次洗涤样本，5μM NBD C6-神经酰胺-BSA复合物在4度下冰浴孵育30分钟。

    3.3 HBSS/HEPES冲洗，10% FBS或2mg/mL的BSA在室温下孵育30~90分钟，以提高高尔基体染色。

     3.4 样品洗净，装入并通过荧光显微镜观察。