产品编号：BTN51207

规格：100U

产品及特点：

Pfu DNA Polymerase是Pyrococcus furiosis （激烈火球菌）DNA Polymerase基因在大肠杆菌中表达并经多次过柱纯化分离而得。可用于高保真PCR、长链PCR的扩增，还可以用于DNA片段的粘转平反应。

1.它具有3’-5’聚合酶活性，跟常用的Taq DNA聚合酶一样，能够用于PCR反应。

2.与Taq DNA Polymerase不同的是，它还具有3’-5’外切酶活性，能纠正DNA扩增过程中产生的碱基错配。

3.其出错率zui低的是具有校正功能的耐高温DNA Polymerase中zui低的。

4.Pfu DNA聚合酶比普通Taq DNA 聚合酶热稳定性更好，95℃ 1小时仍维持90％以上活性。

规格及成分：

保存条件：

低温运输，-20℃保存。

使用方法：

以λDNA为模板进行PCR扩增反应为例

1.按下列组份配制PCR反应液。                    

推荐50 μL PCR反应体系中模板DNA推荐使用量    

2.PCR反应条件

以λDNA为模板，扩增1 kbp的DNA片段的PCR反应条件如下：

94℃       3 min

94℃ 30 sec.     

55℃ 30 sec.        30-35cycles

72℃ 2 min.

72℃     5 min

注：PCR反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定zui佳的反应条件（温度、时间等）。

注意事项:

PCR的反应液请在冰中配制，然后置于PCR反应仪上进行PCR反应。这种冷启动法（Cool Start Method）可增强PCR扩增的特异性，减少PCR过程中的非特异性反应，能得到良好的PCR结果。

相关资料:

10×Pfu Buffer的组成

10×Pfu Buffer                            

Tris–HCl (pH8.8)                 200 mM

KCl                               100 mM

(NH₄)₂SO₄                           100 mM

MgSO₄                              500 mM

活性定义

用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃，30分钟内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位。

质控标准

1、SDS-PAGE 考马市亮蓝染色无杂带污染。

      2、无核酸内切酶活性检测（切刻酶活力）、核酸外切酶活性、核酸酶活性检测。