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产品编号：BTN60105
规格：50T
产品及特点：
本产品利用Taq DNA polymerase 的不依赖于模板的末端转移酶活性，在只有dATP 存在的情况下，在平末端的DNA 片段加上一个dA 尾巴，使平末端片段也能被T 载体克隆。
1. 简单，2×Tailing Buffer 中含有所需要的所有成分,不需要单独准备。
2. 适用于任何平末端的DNA 片段，包括Pfu DNA polymerase 等酶合成的DNA 片段。
3. 产物可以直接用于与T 载体的连接。
格及成分：
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成分 |
规格 |
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Taq DNA polymerase (5U/μL) |
50μl |
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2×Tailing Buffer |
1ml |
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说明书 |
1份 |
保存条件：
低温运输，-20℃保存，有效期一年。
自备试剂：
PCR 片段、超纯水。
使用方法：
一：反应前纯化处理：
用Vent, Deep Vent, Pfu, Pwo 等具有3 到5 外切活性的DNA 聚合酶扩增得到的DNA片段，必须经过彻底的去除残留的酶的处理过程（如酚/氯fang抽提或Proteinase K处理），否则它们将在加A 反应时，切除掉加上的A尾巴，干扰反应。可以采取胶回收和酚/氯fang抽提法等常规方法纯化，zui后溶解在水或TE 中，终浓度以0.1 μg/μL为宜。
二：加A反应
在干净的0.5 mL 或1.5 mL 离心管中，分别加入下列成分：
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回收的DNA片段 |
0.2-2μg |
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2×dA Tailing Buffer |
25μL |
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Taq DNA polymerase（5U/μL） |
1μL |
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补水到 |
50μL |
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72℃保温2小时 |
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三：反应后处理
加A反应后，Taq DNA polymerase 将与DNA末端紧密结合，所以必须酚/氯fang抽提去除。如果使用Proteinase K处理后再用酚/氯fang抽提效果会更好。得到的DNA 溶于适量水和TE 中后即可用于T载体的连接反应。