产品编号：BTN70202

规格：50T

产品及特点：

本产品是专门用于提取酵母质粒DNA 的产品(不适用于酵母dsRNA 质粒)。本产品根据酵母细胞壁十分坚硬的特点，在细菌质粒碱裂解法的基础上，增加了高效裂解酵母细胞壁的预处理步骤，可在1 小时左右得到可以用于PCR 或转化酵母质粒DNA。

1. 快速，整个过程只需要一个小时左右，可同时处理多个样品。

2. 得到的酵母质粒DNA 纯度高，可直接用于转化和PCR 等实验。

3. 可以从平板上的菌斑或液体培养的酵母中抽提质粒DNA。

4. 安全，不需使用玻璃珠、酚、氯fang等试剂。

5. 每5-10 mL 酵母培养液一般可以提取到1μg左右的高拷贝酵母质粒DNA。

6. 即开即用，经济实惠，客户自己不需要准备额外的试剂。

规格及成分：

保存条件：

常温运输及保存（RNase A 溶液4℃保存），有效期一年。

自备试剂：

无菌水。

使用方法：

1. 将5-10 mL 酵母过夜液体培养物分多次转移到1.5 mL 塑料离心管中。每转移一次后，需要12000-15000×g 室温离心1分钟，然后吸弃液体培养基。注意：不要使用培养时间超过16 小时的酵母液体培养物，否则质粒DNA 产量偏低；也不要使用超过10 mL 的酵母液体培养物，否则破壁不充分，降低质粒DNA 产量。

2. 加入1 mL 自备的无菌水，充分震荡混匀，12000-15000×g 室温离心1分钟，吸弃上清。

3. 加入600 μL 溶液A，充分震荡细胞沉淀重悬，95℃保温10分钟。

4. 12000-15000×g 室温离心1分钟，弃上清液。

5. 加入250 μL 含破壁酶的溶液B (配制方法是将本试剂盒提供的50mg 粉末状的破壁酶和0.15mL RNase A溶液全部加入到装有13 mL溶液B的塑料瓶中，轻柔摇晃混匀后使用。未用完的部分需要分装成小份然后放-20℃保存，否则破壁酶很容易失去活性)，吹打混匀。

6. 37℃保温30分钟，延长保温时间到60分钟有利于细胞壁的裂解。注意：放置较长时间后，溶液B 中的裂壁酶会逐渐失活，额外再加入一些裂壁酶（如蜗牛酶、Lyticase、Zymolyase、Lywallzyme 等，总浓度为1 mg/mL）可以极大提高产量。

7. 将离心管放冰浴冷却后，加入250 μL 溶液C，轻轻颠倒混匀直至裂解液变得澄清，然后室温放置5-10分钟。注意：不要剧烈震荡，否则基因组DNA 将断裂并污染质粒DNA。

8. 加入350 μL 溶液D，轻轻颠倒混匀几次，管内将出现白色沉淀物，然后冰浴放置10-30分钟（如果质粒较长，zui好放置30分钟）。

9. 12000-15000×g 室温离心6-10分钟，将上清液转移到离心吸附柱中。

注意：不要将漂浮在液面的沉淀物（如果有的话）转移到离心吸附柱中。上清液可以分多次转移。

10. 室温下放置至少2分钟以让质粒DNA 充分结合到离心吸附柱上。

11.12000-15000×g 室温离心1分钟，弃穿透液。

12. 将 500 μL 通用洗柱液加入离心吸附柱中，12000-15000×g 室温离心1分钟，弃穿透液。

13. 重复上步操作一次。

14.12000-15000×g 室温离心1分钟去除离心吸附柱中残留液体。不要此步省略，否则残留洗液将影响后续的电泳、PCR 和转化实验。

15. 将离心吸附柱套在一干净的1.5 mL 塑料离心管中，加入30-100 μL DNA 洗脱液2.0（加入的量取决于预期的DNA 浓度）至离心吸附柱的膜的中央。

16. 室温下放置至少2分钟。

17.12000-15000×g 室温离心1分钟以洗脱DNA。

18. 如有必要，可以再加入适量DNA 洗脱液2.0洗出残留的DNA。第二次洗脱得到的DNA 的产量约为一次的30-50%。不要将已经洗脱的、含DNA 的溶液再加上去。