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4种食源性致病菌的多重PCR检测方法的建立
摘要 
目的 :建立一种快速、经济、实用的多重 PCR方法 ,能同时检测 4种常见致病菌。方法 :根据沙门菌的侵袭蛋白 A ( invasion p rotein A, invA)、志贺菌的侵袭性质粒抗原 H基因 ( invasion p lasm id antigen, ipaH)、副溶血性弧菌的属特异性 基因 ( thermolabile hemolysin, tl)和肠致病性大肠埃希菌的微绒毛粘连基因 ( eaeA)分别设计了 4对引物 ,预计 PCR扩增的 目的片段依次为 284、606、450、891 bp。对单个基因 PCR和单管多重 PCR扩增进行特异性、敏感性试验以及优化反应体 系 ,建立了快速检测沙门菌、志贺菌、副溶血性弧菌、肠致病性大肠埃希菌的单管多重 PCR 方法。结果 :含沙门菌 42 cfu /g、志贺菌 36 cfu /g、副溶血性弧菌 116 cfu /g、肠致病性大肠埃希菌 91 cfu /g的肉馅样品经过增菌、DNA提取、扩 增、电泳 ,在 16～18 h内应用多重 PCR体系能够检出。通过对 12株目的菌和 15株非目的菌检测 ,提示该体系特异性高。 结论 :初步建立能快速、灵敏、特异地检测沙门菌、志贺菌、副溶血性弧菌、肠致病性大肠埃希菌的多重 PCR体系 ,可以作 为食物中毒病原菌检测的有效方法。