一.固定化酶
固定化酶是指利用物理吸附或化学结合法将自由酶固定到载体上,以提高酶的操作稳定性和反复回收利用酶的技术。
游离酶在生物化学和生物医用化学方面的应用往往不尽如人意,而将酶固定在磁性载体上则有许多有点:可以提高酶的热稳定性、存放稳定性和操作稳定性;改善酶的生物相容性、免疫活性、亲疏水性;固定化酶从反应体系中分离和回收简便,可重复使用,而且产物不受污染易于精制;若将多种酶结合在微球上还可进行多酶反应;可利用外部磁场控制磁性材料固定化酶的运动和方向,从而代替传统的机械搅拌方式,提高固定化酶的催化效率;固定化酶再生性好,使用效率高;可用于连续生产,降低生产成本;可在外加磁场作用下快速分离,适于大规模连续化操作。
一般来说,磁性载体的性质对固定化酶的应用十分重要,它需满足一定的条件:
1.磁响应性要好;
2.可与生物相容;
3.能够提供足够大的表面积,使酶反应顺利进行,降低反应基质和产物的分散限制;
4.有一定的机械强度;
5.具有再使用性;
6.带有反应性的功能基团。
高分子磁性微球作为固定化酶的载体,已显示出优异的吸附性能、良好的操作稳定性及较高的固定效果等优点,但由于酶在磁性高分子微球表面的缠结、取向等因素,其稳定性和活性往往会降低。
Iman等人将磁性聚苯乙烯微球加入脲酶的磷酸缓冲液中,35℃下水浴搅拌150min,得到固定化酶,这种微球在外部磁场的作用下在流动反应器中可以不停地运动,磁性微球对弱磁场有较好的响应性,而且本身不会聚集。
二.免疫分析及测定
免疫分析在现代生物分析技术中是一种重要的方法,它对蛋白质、抗原、抗体及细胞的定量分析发挥着巨大作用。磁性高分子微球用于免疫分析,其原理是在磁性高分子微球表面接枝定向吸附于细菌的抗体,并利用它与原液混合、沉降,在磁场作用下分离、提纯,得到吸附于磁性高分子微球上的活细菌。磁性高分子微球可偶联抗体分离带特定抗原的免疫细胞,利用磁性高分子微球结合的抗原或抗体进行免疫分析,具有特异性高、分离快、重现性好等特点。
三.生物化学合成
以磁性高分子微球为载体的固相有机合成技术,不仅可充分发挥固相合成的优势,而且在反应完成后,可迅速地将目标产物从剩余反应物、副产物及溶剂中方便地分离出来,且不影响产物的性质与纯度。