分光光度计是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度,对该物质进行定性和定量分析的测量仪。它主要由光源、单色器、样品室、检测器、信号处理器和显示与存储系统组成。目前,它已经成为现代分子生物实验室常规仪器,常用于核酸,蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。
以722型分光光度计为例,来介绍分光光度计的使用方法:
(1)将灵敏度旋钮调整"1"档(放大倍率小)。
(2)开启电源,指示灯亮,仪器预热20分钟,选择开关置于"T"
(3)打开试样室盖(光门自动关闭),调节"0%T"旋钮,使数字显示为"00.0"。
(4)将装有溶液的比色皿放置比色架中。
(5)旋动仪器波长手轮,把测试所需的波长调节至刻度线处。
(6) 盖上样品室盖,将参比溶液比色皿置于光路,调节透过率"100%T"旋钮,使数字显示为"100.0T"(如果显示不到100%T,则可适当增加灵敏度的档数,同时应重复"3",调整仪器的"00.0")
(7)将被测溶液置于光路中,数字表上直接读出被测溶液的透过率(T)值。
(8)吸光度A的测量,参照"3""6"调整仪器的"00.0"和"100.0",将选择开关置于A旋动吸光度调零旋钮,使得数字显示为.000,然后移入被测溶液,显示值即为试样的吸光度A值。
(9)浓度C的测量,选择开关由A旋至C,将已标定浓度的溶液移入光路,调节浓度按钮,使得数字显示为标定值,将被测溶液移入光路,即可读出相应的浓度值。
(10)仪器在使用时,应常参照本操作方法中"3""6"进行调"00.0"和"100.0"的工作。
(11)每台仪器所配套的比色皿不能与其它仪器上的比色皿单个调换。
(12)本仪器数字显示后背部,带有外接插座,可输出模拟信号,插座1脚为正,2脚为负接地线。
(13)如果大幅度改变测试波长时,需等数分钟后才能正常工作。(因波长由长波向短波或短波向长波移动时,光能量变化急剧,光电管受光后响应较慢,需一段光响应平衡时间。