国家质检总局在《企业生产婴幼儿配方乳粉许可条件审查细则(2010年版)》中,首次要求企业对购入的生乳和原料乳粉批批进行三聚氰胺检验,强调三聚氰胺为出厂自行检验项目,并要求相关企业须有两名以上可独立检验三聚氰胺的检验人员。
关于三聚氰胺的测定,我国在2008年10月和11月分别出台了《GB/T22388-2008原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》和《GB/T22400-2008原料乳三聚氰胺快速检测》。GB/T22388-2008规定了三种测定方法,即高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱/质谱法(LC-MS/MS)和气相色谱-质谱联用法(GC-MS)和GC-MS/MS)。
本实训采用高效液相色谱法,定量限为2mg/kg(依据GB/T22388-2008第一法)。
1.目的要求
(1)理解高效液相色谱法测定原料乳及乳制品中三聚氰胺的原理。
(2)掌握高效液相色谱仪仪器条件建立方法和操作。
2.实训原理
试样中的三聚氰胺用三氯乙酸溶液-乙腈提取,经阳离子交换固相萃取柱净化后,用高效液相色谱测定,外标法定量。
3.实训用品
(1)高效液相色谱仪:安捷伦1100型配置紫外检测器或二极管阵列检测器。
(2)分析天平:感量为0.0001g和0.01g。
(3)离心机:转速不低于4000r/min。
(4)超声波水浴。
(5)固相萃取装置。
(6)水浴氮气吹干仪:配置氮气钢瓶或其他氮气源。
(7)旋涡混合器。
(8)具塞塑料离心管:50mL。
(9)研体。
(10)混合型阳离子交换固相萃取柱:规格60mg 3mL,推荐使用WATERS公司MCX或博纳-艾杰尔公司产品PCX或相当者。
(11)甲醇:色谱纯。
(12)乙腈:色谱纯。
(13)氨水:含量为25%~28%。
(14)三氯乙酸。
(15)柠檬酸。
(16)辛烷磺酸钠:色谱纯。
(17)甲醇水溶液:准确量取50mL甲醇和50mL水,混匀后备用。
(18)三氯乙酸溶液(1%):准确称取10g三氯乙酸于1L容量瓶中,用水溶解并定容至刻度,混匀后备用。
(19)离子对试剂缓冲液:准确称取2.10g柠檬酸和2.16g辛烷磺酸钠,加入约980mL水溶解,调节pH至3.0后,定容至1L备用。
(20)氨化甲醇溶液(5%):准确量取5mL氨水和95mL甲醇,混匀后备用。
(21)三聚氰胺标准品:CAS108-78-01,纯度大于99.0%。
(22)三聚氰胺标准储备液:准确称取100mg(精确到0.1mg)三聚氰胺标准品于100mL容量瓶中,用甲醇水溶液溶解并定容至刻度,配制成浓度为1mg/mL的标准储备液,于4℃避光保存。
(23)三氯乙酸溶液饱和的正己烷(可选):取200mL正己烷和100mL三氯乙酸溶液一起放入500mL分液漏斗中,充分混合振荡,静置分层,取上层正己烷备用。
除非另有规定,所用试剂均为分析纯。水为GB/T6682-2008规定的一级水。
4.安全提醒
(1)三氯乙酸具有吸入毒害性、腐蚀性,需在通风橱内使用和配置,操作使用橡胶手套。
(2)甲醇有较强的毒性,经消化道、呼吸道或皮肤摄入都会产生毒性反应,其蒸气能损害人的呼吸黏膜和视力,须在通风橱内使用和配置,操作使用橡胶手套。
(3)离心机操作时样品须呈对称放置,放置前应确保对称方向上的样品重量一致,以有效避免离心机转轴发生偏转,造成设备损坏甚至发生危险。
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文章来源:《食品理化检测技术》