大肠杆菌的基因工程

　　

　　一、原理

       微生物 细胞在超声波的作用下，细胞结构受到破坏，而使细胞破碎。

　　

　　二、材料与试剂

       超声波破碎仪、显微镜、烧杯、细胞破碎缓冲液(10mmol/L，PH7.4Tris-HCL缓冲液中含5mmol/L的MgCL2)、细胞悬浮液(取50-100mg)大肠杆菌 湿细胞悬浮在1ml细胞破碎缓冲液中)、培养基(牛肉膏0.5%、蛋白胨1%，NaCL0.5%制成肉汤液体培养基。取上述肉汤培养基加进2%琼脂 ，制成固体培养基，用作菌种活化与保藏)。

　　

　　三、操作方法

　　

　　1、细胞培养 和收集：将活化菌种接入肉汤培养基中，于37℃振荡培养。当到达对数生长期后(约6h)，用离心机 收集细胞，8000r/min离心5min，或3000r/min离心20min。

　　

　　2、在显微镜下观察细菌 的形态特征。

　　

　　3、细胞破碎：取湿细胞50-100mg悬浮于1ml细胞破碎缓冲液中。用20kHz频率，150W的功率，在冰浴中进行超声波破碎，每破碎60s，间隔60s，反复破碎三次。

　　

　　4、在显微镜下观察破碎后的细胞形态。