气相色谱仪外标法定量分析优缺点和适用情况说明
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解决时间 2019-08-05 15:58
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- 2019-08-05 15:56
最佳答案
- 2019-08-05 15:57
一、外标法的概念
外标法又称标准曲线法，依照测量标准品所绘制的曲线计量被测样品含量的方法。
外标法是用待测组分的纯品作对照物质。此法可分为工作曲线法及外标一点法等。工作曲线法是用对照物质配制一系列浓度的对照品溶液确定工作曲线，求出斜率与截距。准确进样与对照品溶液相同体积的样品溶液，根据待测组分的信号，从标准曲线上查出其浓度或用回归方程计算，工作曲线法也可用外标二点法代替。
二、外标法的优缺点
优点：
简单、适合大量样品分析；
缺点：
每次色谱条件很难相同，容易出现误差；
我们作体外药物分析时均采用外标法，体内药物分析，因提取步骤烦琐，都采用内标法进行校正，但如果仪器稳定、方法的重现性好，也可使用外标法，国外体内药物分析用外标法的也有不少，但小析姐认为最好使用内标法。
实际样品检测用外标法的更多，原因如下：
1.内标物难获得，特别是同位素标记的有相近行为的内标物；
2.操作步骤多、计算烦琐；
如，在新药报批中使用内标物，则需报送内标物的结构确证资料，在报生产的同时还要报送此内标物对照品。所以，现在连SDA的专家都不推荐使用内标法。
最初使用内标是因为进样器进样不准确，采用内标可以校正进样误差。现在的HPLC用定量环进样准确度很高，加了内标有时候因为操作的误差反而降低准确度。在药物质量检验中，如果是原料药，或者制剂的成份不多，用外标法即可，不一定非要用内标法，并且目前越来越多的标准均放弃使用内标法。
对于体内药物分析，分析方法的误差反而不重要，而在样品处理过程中引入的误差要引起足够的重视，所以，一般在处理过程中加入内标以校正误差。此时，回收率的高低要求并不高，虽然要求绝对回收率在70%或80%以上，但是，有时低一些也无所谓，关键是回收率的稳定性、测定的重现性。
三、定量分析中怎样选择内标法或外标法
内标与外标都是气相色谱仪定量的一种方法而已，至于方法的好坏不能一概而论，做不同的分析，面对不同的要求，再加上分析成本、分析效率等问题，简单而有效进行定量分析满足要求才最重要。
1、从前做过很多医药、农药中间体的芳香族卤代化合物的常量定量分析，没有自动进样器，用外标法定量，确实重现性与稳定性非常差，结果经常受到搞合成同事的质疑。
2、上面已经提到当做方法验证的时候，当同一样品配制6个样品溶液用所选用的外标法进行定量的时候，RSD都满足1.5%的要求时，也分为两种情况，小于1%和大于1%，小于1.5%。
3、对于微量分析，比如农药和兽药残留的分析、环境分析等，根据不同的限量标准要求对于精密度的要求也比常量分析的要求要宽松的多，RSD有时可以允许达到10%甚至更高，这时可能外标法有更大的应用空间。
4、单从精密度方面去考虑，排除其它成本和效率的因素，个人认为还是内标优于外标。
应用外标法能够满足要求，首选还是外标法了，毕竟简单而省事。对于精密度要求比较高、结果准确度会产生重大影响、实验室条件不是很理想的等等条件下，用内标法还是必要的。无论应用那种方法，方法的验证和确认都是很重要的，只要是按照程序经过验证和确认的方法，都有其应用的空间。
外标法又称标准曲线法，依照测量标准品所绘制的曲线计量被测样品含量的方法。
外标法是用待测组分的纯品作对照物质。此法可分为工作曲线法及外标一点法等。工作曲线法是用对照物质配制一系列浓度的对照品溶液确定工作曲线，求出斜率与截距。准确进样与对照品溶液相同体积的样品溶液，根据待测组分的信号，从标准曲线上查出其浓度或用回归方程计算，工作曲线法也可用外标二点法代替。
二、外标法的优缺点
优点：
简单、适合大量样品分析；
缺点：
每次色谱条件很难相同，容易出现误差；
我们作体外药物分析时均采用外标法，体内药物分析，因提取步骤烦琐，都采用内标法进行校正，但如果仪器稳定、方法的重现性好，也可使用外标法，国外体内药物分析用外标法的也有不少，但小析姐认为最好使用内标法。
实际样品检测用外标法的更多，原因如下：
1.内标物难获得，特别是同位素标记的有相近行为的内标物；
2.操作步骤多、计算烦琐；
如，在新药报批中使用内标物，则需报送内标物的结构确证资料，在报生产的同时还要报送此内标物对照品。所以，现在连SDA的专家都不推荐使用内标法。
最初使用内标是因为进样器进样不准确，采用内标可以校正进样误差。现在的HPLC用定量环进样准确度很高，加了内标有时候因为操作的误差反而降低准确度。在药物质量检验中，如果是原料药，或者制剂的成份不多，用外标法即可，不一定非要用内标法，并且目前越来越多的标准均放弃使用内标法。
对于体内药物分析，分析方法的误差反而不重要，而在样品处理过程中引入的误差要引起足够的重视，所以，一般在处理过程中加入内标以校正误差。此时，回收率的高低要求并不高，虽然要求绝对回收率在70%或80%以上，但是，有时低一些也无所谓，关键是回收率的稳定性、测定的重现性。
三、定量分析中怎样选择内标法或外标法
内标与外标都是气相色谱仪定量的一种方法而已，至于方法的好坏不能一概而论，做不同的分析，面对不同的要求，再加上分析成本、分析效率等问题，简单而有效进行定量分析满足要求才最重要。
1、从前做过很多医药、农药中间体的芳香族卤代化合物的常量定量分析，没有自动进样器，用外标法定量，确实重现性与稳定性非常差，结果经常受到搞合成同事的质疑。
2、上面已经提到当做方法验证的时候，当同一样品配制6个样品溶液用所选用的外标法进行定量的时候，RSD都满足1.5%的要求时，也分为两种情况，小于1%和大于1%，小于1.5%。
3、对于微量分析，比如农药和兽药残留的分析、环境分析等，根据不同的限量标准要求对于精密度的要求也比常量分析的要求要宽松的多，RSD有时可以允许达到10%甚至更高，这时可能外标法有更大的应用空间。
4、单从精密度方面去考虑，排除其它成本和效率的因素，个人认为还是内标优于外标。
应用外标法能够满足要求，首选还是外标法了，毕竟简单而省事。对于精密度要求比较高、结果准确度会产生重大影响、实验室条件不是很理想的等等条件下，用内标法还是必要的。无论应用那种方法，方法的验证和确认都是很重要的，只要是按照程序经过验证和确认的方法，都有其应用的空间。