“为什么”高效液相色谱分离柱的“柱压”比较高
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解决时间 2019-03-23 15:17
- 已解决maike
- 2019-03-23 14:51
最佳答案
- tianmei
- 2019-03-23 15:12
遇到色谱系统的压力过高,首先判断压力产生的部位,可以用分段拆卸的方法判断,一般从后向前拆,先断开色谱柱与检测器的链接,压力不下降或降低不明显,检测器没有堵塞,否则检测器堵塞;再拆掉色谱柱,压力明显下降,色谱柱有问题,反之泵的出口堵塞,色谱柱没问题。当确定是色谱柱的问题后有以下原因: 1)保护柱或柱头吸附了大量的不能洗脱的物质,如长期用甲醇溶解的中药样品或含有高分子材料、蛋白质的样品,长期使用后,那些不能溶解在流动相中的物质会在柱头或保护柱析出,堵塞色谱柱,柱压升高。 2)多元泵使用缓冲盐溶液和有机相混合,缓冲液的浓度过高或有机相的比例过大,混合后缓冲盐在柱头析出,柱压升高。 3)流动相甲醇的比例在45%-60%之间,这一比例范围的流动相本身粘度大,柱压升高。 4)长期不使用的色谱柱,溶剂挥干,使用的初期柱压升高。 5)长期不使用色谱柱,饱和色谱柱的溶液是水或低浓度甲醇(浓度小于10%),色谱柱内有细菌滋生,柱压升高。 6)未养成及时清洗色谱柱的习惯,前面实验的样品残留未及时冲洗。 7)使用含有缓冲盐的流动相,在更换流动相前未用10%的甲醇或水冲洗色谱柱,导致缓冲盐在色谱柱析出。 8)保护柱已经失效或过脏,及时更换。